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    細小病毒抗體檢測試劑盒(酶聯免疫法) 使用說明書

    發布時間:2022-04-07   點擊次數:164次

    細小病毒抗體檢測試劑盒(酶聯免疫法)

    使用說明書

    【產品名稱】

    通用名:豬細小病毒抗體檢測試劑盒(酶聯免疫法)

    英文名:Test Kit for Antibodies to Porcine Parvovirus  (ELISA)

    【包裝規格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

    【預期用途】 豬細小病毒病是由豬細小病毒Porcine Parvovirus,PPV)引起豬的繁殖障礙性疾病,其特征為受感染的母豬,特別是初產母豬產出死胎、畸形胎、木乃伊胎及病弱仔豬,而母豬本身無明顯癥狀。

    本試劑用于檢測豬血清中豬細小病毒抗體,可用于豬細小病毒疫苗免疫效果評價。

    【原    理】

        本試劑盒由預包被豬細小病毒抗原的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成,應用酶聯免疫法(ELISA)原理檢測豬血清、血漿樣本中豬細小病毒抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本,經溫育后若樣品中含有豬細小病毒抗體,則將與酶標板上抗原結合,經洗滌除去未結合的其他成分后;再加入酶標記物,與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合;再經洗滌除去未結合的酶標記物,在孔中加TMB底物液,與酶標結合物反應形成藍色產物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關;加入終止液終止反應后,產物變為黃色;用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,即可知樣品是否含有豬細小病毒抗體。

    【試劑盒組成】

    序號

    名稱

    規格/96T×1

    規格/96T×2

    規格/96T×5

    1

    酶標記物

    11ml×1(紅蓋)

    11ml×2(紅蓋)

    26ml×2(紅蓋)

    2

    樣品稀釋液

    50ml×1(黃蓋)

    50ml×1(黃蓋)

    200ml×1(黃蓋)

    3

    20X濃縮洗滌液

    40ml×1(白蓋)

    40ml×1(白蓋)

    200ml×1(白蓋)

    4

    底物液A

    6ml×1(白蓋)

    11ml×1(白蓋)

    26ml×1(白蓋)

    5

    底物液B

    6ml×1(黑蓋)

    11ml×1(棕蓋)

    26ml×1(黑蓋)

    6

    終止液

    6ml×1(黃蓋)

    11ml×1(黃蓋)

    26ml×1(黃蓋)

    7

    陽性對照

    1.0 ml×1(紅蓋)

    1.5 ml×1(紅蓋)

    2.0 ml×1(紅蓋)

    8

    陰性對照

    1.0 ml×1(綠蓋)

    1.5 ml×1(綠蓋)

    2.0 ml×1(綠蓋)

    9

    酶標板

    96T×1

    96T×2

    96T×5

    10

    蓋板膜

    1

    2

    5

    11

    自封袋

    1

    1

    2

    12

    說明書

    1

    1

    1

    13

    稀釋板

    1

    2

    5

     

    【儲存及有效期】 2~8℃保存,有效期12個月。

    包被板開封后請于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個月。

    【適用儀器】 450nm、630nm波長的酶標儀,37℃恒溫設備,可調微量移液器。

    【樣品準備】

    1.取動物全血按常規方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。

    2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋(如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽性對照不用稀釋。

    3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

    【檢驗方法】

    1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。

    2.取所需用量酶標板條,設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。

    3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl;陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

    4.混勻,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水?。┍芄夥磻?0分鐘。

    5.甩去孔內液體,每孔加350 ul工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,最后一次拍干。

    6.每孔加酶標記物100μl(空白孔除外)。蓋好蓋板膜,置37℃避光反應30分鐘。

    7.洗滌,同步驟5。

    8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應10分鐘。

    9.每孔加終止液50μl,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值,無參比波長用空白孔調零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。

    【參考值】 實驗正常的情況下,陰性對照的平均OD值即ODNC0.3,陽性對照的平均OD值即ODPC0.6。

    【檢驗結果的判定】

    1.樣品的OD值即ODS;

    2.閾值計算:SP值=(ODS-ODNC/(ODPC-ODNC);

    SP值≥0.2,結果判定為陽性;SP值<0.2,結果判定為陰性。

    3.本實驗結果為陰性時表明豬只抗體水平不足,建議補打相應疫苗。

    【試驗方法的局限性】

        該試驗僅作為定性檢測豬血清、血漿中豬細小病毒抗體,根據SP值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。

    【注意事項】

    1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣,嚴格健全和執行消毒隔離制度,各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。

    2.終止液具有腐蝕性,應避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

    3.酶標板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋,未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

    4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶,使用時需恢復至室溫以完全溶解。

    5.洗滌時各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。

    6.用于檢測的樣品應保持新鮮。

    7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。

    8.不同批號試劑組分不得混用。


    上海仁捷生物科技有限公司

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