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    科研ELISA試劑盒是干什么用的,又該怎么用呢?

    發布時間:2020-07-21   點擊次數:1017次
       科研ELISA試劑盒即酶聯吸附試驗,是一種常用的固相酶免疫測定方法。Engvall 和Perlmann于1971年應用該法進行了IgG定量測定,并命名為"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。
      科研ELISA試劑盒免疫測定的目的:
      1.測定體液中的各種蛋白質,包括含量極少的蛋白質如甲胎蛋白等;
      2.測定激素,包括小分子量的甾體激素等;
      3.測定抗生素和藥物;
      4.測定病原體抗原,HBsAg、HBeAg等;
      5.利用純化的抗原檢測標本中的抗體,例如抗-HBs等;
      ELISA的基本原理
     ?、偈箍乖ɑ蚩贵w)結合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性;
     ?、谑箍乖ɑ蚩贵w)與某種酶聯結成酶標 抗原(或抗體),而且此酶標抗原(或抗體)既保留其免疫活性,又保留其酶活性;
     ?、蹨y定時將受檢標本(抗體或抗原)和酶標抗原(或 抗體)按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進行反應,再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其它物質分開,后結合 在固相載體上的酶量與標本中受檢的抗體或抗原量成一定比例;再加入酶反應底物后,底物被酶催化后變為有色產物,根據其顏色反應的 深淺進行定性或定量分析,以了解被測標本中抗體或抗原含量。
      科研ELISA試劑盒實驗方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術要求,在中 除正常反應外,有時??梢姷揭恍╁e誤結果(即假陽性或假陰性結果)。引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有:①標本因素;②試劑因素;③操作因素。本文就標本因素對ELISA測定的影響做如下討論。
      科研ELISA試劑盒實驗步驟
      1.包被;
      2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔);
      3.加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
      4.加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘;
      5.終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml;
      6.結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm處,以空白對照孔調零后測各孔OD值。
      血清是ELISA標本,血漿一般可視為與血清同等的標本,標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致,分為內源性物質和外源性物質兩種。
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